基因过表达效果检测

服务介绍

研究基因的表达与功能时，科研工作者首先需要将外源DNA导入细胞/组织中。DNA的体内外递送需要用到运输工具-载体，而质粒和病毒是两种常用的基因递送载体。通过将目的基因克隆至相应的表达载体，利用细胞转染或者病毒感染的方式实现外源基因的过表达。外源基因的过表达效果如何是科研工作者非常关心的问题。维真生物可以采用常规分子生物学技术揭示结果。

服务内容

维真生物可为客户提供基因转录水平和翻译水平的基因表达检测服务，具体信息详见下表；

*如您对上述服务感兴趣，请您点击“欢迎垂询”留下您的信息，我们将为您提供具体实验方案和项目价格。

实时定量PCR & Western blot

实时定量PCR是定量分析mRNA最通用、最快速和最简便的方法。该方法利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对待测样品进行定量分析，具有很高的灵敏性和特异性。目前，实时定量PCR常用的为荧光染料嵌合法(SYBR Green)和荧光探针法。其中，荧光染料嵌合法(SYBR Green)是最经济、最简便的，它利用荧光染料(SYBR Green)与双链DNA分子结合发光的特性，指示PCR扩增产物的增加，从而揭示基因转录水平的表达特征。

Western blot，也称免疫印迹，是利用抗原与抗体特异性结合的原理检测外源基因表达的特异蛋白质。经过PAGE胶分离的蛋白质样品，转移到固相支持物（如硝酸纤维素膜、PVDF膜）上，固相支持物以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相支持物上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的二抗起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异目的基因表达的蛋白质。该技术被广泛应用于定性和半定量分析蛋白表达水平，从而揭示基因翻译水平的表达特征。

服务流程

相关资料

质粒转染试剂说明书

基因过表达不成功怎么办？

Step 1 通过查看测序结果检查重组质粒构建是否正确。

Step 2 实时定量PCR验证基因是否成功转录。

Step 3 Western Blot检测蛋白是否成功过表达。

通过以上3步排查法，锁定问题所在，针对性地解决问题。

通常，标签的使用、制备质粒的质量、抗体的有效性、蛋白的寿命、特殊类型的蛋白和基因序列的复杂性均会影响好的实验结果。另外，实验时对照组的设置也是非常关键的，合理的对照可以帮助科研工作者得到完美的实验结果，一旦出现问题，也便于科研工作者快速找到问题所在。