AAV血清型开发，助力基因治疗！

小V前期已经为大家介绍了维真生物特有的AAV血清型快速筛选试剂盒，本期将向大家介绍如何筛选新的AAV血清型。

腺相关病毒（AAV）的多种特点如：组织特异性、良好的扩散性、低免疫原性、高安全性和稳定性，使其成为基因治疗的首选载体。AAV的血清型是由AAV的衣壳蛋白决定的，天然的AAV衣壳有成百上千种，不同的衣壳蛋白（AAV血清型）提供了多样性的组织侵染能力，这为避开基因治疗宿主已有的对某些衣壳蛋白的免疫抗性提供了可能，但这也为利用AAV进行基因治疗的项目开发造成一些困难。较早用于基因治疗的AAV（如2型和5型）可以侵染多种组织和细胞，且已没有专利保护，但仍有多达50-60%人群具有这些AAV的抗体或细胞免疫，从而限制了这些AAV用于基因治疗。新发现的非人灵长类的AAV（如8型和9型），虽然感染人群很少，但都处于专利保护期。

不同的AAV血清型具有一定的组织感染特异性，然而这种组织特异性比较低，通常AAV可以广泛地感染多种组织和细胞，这为如何避免过多感染非目标组织，利用AAV进行基因治疗造成很多困难。

1. 通过搜索文献和正在进行的临床试验来确定可选用的AAV血清型，http://www.genetherapynet.com/clinicaltrialsgov.html 汇集了正在进行的基因治疗临床试验，通常都可以找到选用的AAV血清型的资料。

2. 利用维真生物特有的AAV血清型筛选试剂盒，检测与验证AAV血清型对靶组织的侵染特异性。

4. 利用维真生物的基因混编（gene shuffling）AAV 血清型文库及AAV衣壳蛋白表面展示文库进行特定方法注射、特定组织的定向演化（directed evolution screen），筛选新的AAV血清型。

图2 定向演化筛选到的对小鼠大脑GFAP阳性细胞具有特异性侵染能力的AAV血清型

利用维真生物的基因混编AAV 血清型文库，经多轮体外与体内筛选，得到一种新的AAV血清型。经小鼠大脑定点注射，三周后取脑组织，切片染色观察。 A. AAV携带的Cre基因激活小鼠体内DIO RFP 的表达。 B. RFP 与小胶质细胞Marker  Iba1共标记。 C. RFP 与星形胶质细胞Marker  GFAP共标记。可见RFP与GFAP可以共标记，但并不与Iba1共标记，反映了新的AAV血清型对GFAP阳性的星形胶质细胞的特异性侵染。

5. 维真生物收集了大约200种自然存在AAV血清型衣壳蛋白基因的克隆。目前业界对这些AAV血清型的组织和细胞感染能力尚没有深入研究，有很大可能存在比目前已知血清型包装效率更高，对组织特异性更高的新的血清型。