CAR-T细胞疗法是近年来推出的新型精准靶向肿瘤治疗技术,2017年美国食品药品监督管理局(FDA)批准了2项以CD19为分子靶标的CAR-T细胞免疫药物上市,用于治疗多种B淋巴细胞白血病,从此开启了细胞免疫治疗的新纪元。经改进的CAR-T免疫疗法也被用来治疗实体瘤、自身免疫疾病、HIV感染和心脏病等疾病,具有广阔的应用空间。
维真生物科研团队经过精心研究,新推出可以稳定表达CD19抗原和copGFP的K562单克隆细胞系,该单克隆细胞系可在杀伤实验中作为靶细胞,评估CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤力;同时该单克隆细胞系携带GFP荧光,可通过流式鉴定GFP的阳性率来检测杀伤效果,从而减少抗体的使用,为客户进行CD19-CAR-T细胞的体外功能性验证带来了极大的方便。
产品名称:K562-CD19-GFP单克隆细胞系
产品货号:CL852678
产品优势: ①稳定表达CD19抗原和copGFP,可作为杀伤实验中有效的靶细胞; ②带有GFP荧光,减少后期杀伤效果检测中抗体的使用,节约成本;
数据支持:
▽ 单克隆细胞鉴定实验 ▽
K562细胞与K562-CD19-GFP单克隆细胞中CD19与GFP表达量的鉴定
▽ 结 果 ▽
用流式细胞术分别对K562细胞和K562-CD19-GFP单克隆细胞中CD19和copGFP的表达量进行检测,检测结果表明,K562-CD19-GFP单克隆细胞中CD19表达量为100%,GFP表达量为99.4%。
经鉴定,该研究成功构建了能够稳定表达CD19和GFP的单克隆细胞株 K562-CD19-GFP。
产品名称:CD3-CD19(BiTE双抗)
货号:AB000006
作用原理:
CD3-CD19 BiTE是一种双特异性T细胞连接蛋白,该蛋白可以连接T细胞和CD19阳性细胞,使T细胞可以选择性接近靶细胞进而达到特异性杀伤的效果。BiTE分子是一种融合蛋白,BiTE由两个单链可变片段(scFv)组成,通过柔性融合接头串联连接。一个scFv识别T细胞表面蛋白CD3,另一个scFv识别特异性肿瘤细胞表面抗原。
CD3-CD19双抗不仅是简单的把T细胞与肿瘤细胞相结合,其通过与T细胞表面CD3受体相结合形成复合物,进一步激活T细胞信号通路,使T细胞表达CD69、CD25,上调细胞黏附分子(CD2)、短暂释放炎症因子,令T细胞活化,促使T细胞增殖,进而引起肿瘤细胞溶胞而死亡。
CD3-CD19双特异性抗体作用机制(Krishnamurthy A et al. Pharmacol Ther, 2018.)
流式检测抗体与T细胞结合活性
效应细胞:激活的T细胞
靶细胞:K562-CD19-GFP单克隆细胞
实验方法: 按照靶细胞每孔1*10^4个,效应细胞每孔1*10^5个(效靶比为10:1)分别加至96孔板中,再加入CD3-CD19双特异性抗体进行杀伤实验。
实验共设置5个梯度,分组如下:
GFP阳性细胞存活率检测
▽ 结果分析:
杀伤24 h后进行流式鉴定,观察GFP阳性细胞的存活率。结果表明,T细胞对K562-CD19-GFP单克隆细胞有很好的杀伤效果,(效应细胞对靶细胞)杀伤率可高达94%,且在一定浓度范围内,GFP阳性细胞的数量与抗体浓度呈负相关。
综合上述研究结果,我们得出以下结论:本研究成功构建了一株单克隆稳转细胞系K562-CD19-GFP,而且利用CD3-CD19双特异性抗体进行的杀伤实验表明,该细胞株能作为T细胞杀伤实验中的有效靶细胞,这一细胞株为客户进行CD19-CAR-T细胞的体外功能性验证带来极大的方便。
本研究中成功构建的K562-CD19-GFP单克隆细胞系,和所使用的CD3-CD19 BiTE双特异性抗体,维真均可为您提供,两者可结合使用,评估效应T细胞的杀伤效率;此外,CD19与copGFP共表达的病毒我们也有现货供应,好物低价,任您选择。真诚欢迎各位新老客户咨询订购!热线电话:400-077-2566。
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