杀伤靶细胞

CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤能力测定是CAR-T免疫细胞治疗中的重要一环，通过CAR-T细胞杀伤携带抗原表位的细胞系从而反映其杀伤效率，是评价CAR-T细胞杀伤能力的重要方法。因此，我们选取了目前较为热门的几个临床靶点，成功开发了方便血液瘤及神经胶质母细胞瘤研究的多株单克隆细胞：K562-CD19-GFP、K562-BCMA-GFP 和 K562-EGFRvIII-GFP，为客户进行CAR-T细胞的体外功能性验证带来了极大的便利。

CAR-T靶点介绍

①CD19是正常和恶性B淋巴细胞特异性表面蛋白，在B细胞的发育，增殖和分化以及恶性转化中发挥重要作用，因其在B淋巴细胞表达的特异性和B淋巴系统恶性肿瘤表达的广泛性，使CD19成为CAR-T治疗B细胞肿瘤的理想靶点。目前，FDA已经批准上市的CAR-T药物治疗靶点都是CD19，且均针对血液瘤，分别是诺华的KYMRIAH和吉利德的YESCARTA。

②BCMA（B细胞成熟抗原/CD269）是TNFR超家族的一种跨膜蛋白，几乎只在成浆细胞和分化的浆细胞表面表达，由于CD19很少在多发性骨髓瘤的恶性浆细胞中表达，因此BCMA被认为是多发性骨髓瘤（MM）的关键诊断标志物和治疗靶点。

③EGFRvIII（表皮生长因子受体变体III/ΔEGFR），近年来发现的一类仅表达于肿瘤细胞表面的，表皮生长因子受体（EGFR）最常见的突变体，是一种肿瘤特异性抗原。神经胶质母细胞瘤（GBM）是原发性脑肿瘤中最常见且死亡率最高的恶性肿瘤，国内外研究发现：40%-60%的GBM显著表达EGFR，且其突变体形式以EGFRvIII为主，因此EGFRvIII是CAR-T疗法治疗神经胶质母细胞瘤的理想靶点。

产品介绍

1.K562-CD19-GFP单克隆细胞系（产品货号：CL852678）

产品优势：

①稳定表达CD19抗原和copGFP，可作为杀伤实验中有效的靶细胞；
②带有GFP荧光，减少后期杀伤效果检测中抗体的使用，节约成本；

数据支持：

1.1 单克隆细胞鉴定实验

K562细胞与K562-CD19-GFP单克隆细胞中CD19与GFP表达量的鉴定

用流式细胞术分别对K562细胞和K562-CD19-GFP单克隆细胞中CD19和copGFP的表达量进行检测，检测结果表明，K562-CD19-GFP单克隆细胞中CD19表达量为100%，GFP表达量为99.4%。经鉴定，稳定表达CD19和GFP的单克隆细胞株K562-CD19-GFP构建成功。

1.2 T细胞杀伤实验

实验方法： 按照靶细胞每孔1*10^4个，效应细胞每孔1*10^5个（效靶比为10：1）分别加至96孔板中，再加入CD3-CD19双特异性抗体进行杀伤实验。

实验共设置5个梯度，分组如下：

GFP阳性细胞存活率检测

杀伤24 h后进行流式鉴定，观察GFP阳性细胞的存活率。结果表明，T细胞对K562-CD19-GFP单克隆细胞有很好的杀伤效果，（效应细胞对靶细胞）杀伤率可高达94%，且在一定浓度范围内，GFP阳性细胞的数量与抗体浓度呈负相关。

2.产品名称：K562-BCMA-GFP单克隆细胞系（产品货号：CL873263）

产品优势：

①稳定表达BCMA抗原和copGFP，可作为杀伤实验中有效的靶细胞；
②带有GFP荧光，减少后期杀伤效果检测中抗体的使用，节约成本；

结果分析：

用流式细胞术分别对K562和K562-BCMA-GFP单克隆细胞中BCMA和copGFP的表达量进行检测，结果表明，BCMA表达量为99.8%，GFP表达量为100%。另外，通过使用高分辨率的明场和荧光成像对细胞进行成像和分析，进一步证实了能够稳定表达BCMA和GFP的单克隆细胞株K562-BCMA-GFP构建成功。

3.产品名称：K562-EGFRvIII-GFP单克隆细胞系（产品货号：CL001346941）

产品优势：

①稳定表达EGFRvIII抗原和copGFP，可作为杀伤实验中有效的靶细胞；
②带有GFP荧光，减少后期杀伤效果检测中抗体的使用，节约成本；

结果分析：

用流式细胞术分别对K562和K562-EGFRvIII-GFP单克隆细胞中EGFRvIII和copGFP的表达量进行检测，结果表明，EGFRvIII表达量为99.1%，GFP表达量为99.7%。另外，通过使用高分辨率的明场和荧光成像对细胞进行成像和分析，进一步证实了能够稳定表达EGFRvIII和GFP的单克隆细胞株K562-EGFRvIII-GFP构建成功。

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