《Molecular Cell》‖ 维真AAV与自噬研究和脂代谢

部分研究成果

1. Pacer磷酸化对小鼠肝脏自噬水平的影响

研究人员采用腺相关病毒腹腔注射的方法，将 AAV-Pacer WT以及Pacer的多种变异体（PacerS157A和Pacer S157D）注射至小鼠体内，并在注射后21天处死小鼠，分析肝脏细胞，检测自噬水平的变化。结果如图1所示：Western blot分析可见，肝脏组织经腺相关病毒感染后，Pacer WT, Pacer S157A和Pacer S157D的表达水平显著增加。

图1. 腺相关病毒介导的Pacer磷酸化变体在肝脏组织中的表达水平及其对自噬基因表达的影响

2. Pacer磷酸化对自噬溶酶体形成的影响

结果如图2所示，采用腺相关病毒介导的Pacer磷酸化变体补救Pacer敲降的U2OS细胞，可见过表达Pacer S157A的去磷酸化变体可显著促进自噬溶酶体的形成，而Pacer S157D的永久磷酸化变体则无法促进自噬溶酶体的形成。

图2. 免疫荧光分析腺相关病毒介导的Pacer磷酸化变体对自噬溶酶体形成的影响

3. Pacer乙酰化对肝脏组织自噬水平的影响

非酒精性脂肪肝建模成功后，采用维真腺相关病毒在肝脏组织过表达Pacer WT和Pacer 2KR变体，结果如图3所示：可见腺相关病毒介导Pacer及其变体可在肝脏组织中表达。

图3. Western blot分析腺相关病毒介导的Pacer乙酰化变体在肝脏组织中的表达情况

4. Pacer乙酰化对肝脏脂质代谢的影响

结果如图4所示，采用高脂饲料喂养建模后采用油红染色和电镜分析，显示肝脏组织和细胞中脂质水平显著增加。而采用腺相关病毒介导Pacer WT可显著降低肝脏组织中脂质水平，腺相关病毒介导Pacer 2KR（乙酰化变体）则无法有效降低肝脏中脂质水平。

图4. 油红染色电子显微镜分析肝脏组织中脂质水平的变化

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