三阴性乳腺癌治疗新靶点：苏占海/钦闪闪/王佳宁团队揭示EMP1调控TNBC肿瘤微环境的关键机制

论文标题：Tumor cell-derived EMP1 is essential for cancer-associated fibroblast infiltration in tumor microenvironment of triple-negative breast cancer

发表期刊：Cell Death and Disease（IF 8.1）

合作客户：青海大学 苏占海教授、湖北医药学院 钦闪闪副教授、十堰市人民医院 王佳宁教授团队

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Lv-4 in 1-shEMP1在MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞的干扰效果

研究背景

乳腺癌（BC）是女性常见的恶性肿瘤之一，三阴性乳腺癌（TNBC）是一种侵袭性强、易转移且缺乏有效治疗靶点的乳腺癌亚型，靶向肿瘤微环境（TME）中的癌症相关成纤维细胞CAFs被认为是治疗TNBC患者的有效策略。上皮膜蛋白1（EMP1）的异常表达在肿瘤进展和转移中起着至关重要的作用，然而，EMP1在TNBC中的生物学作用和分子机制尚未阐明。2025年2月27日，青海大学苏占海教授、湖北医药学院钦闪闪副教授、十堰市人民医院王佳宁教授团队在Cell Death and Disease（IF 8.1）上发表了题为“Tumor cell-derived EMP1 is essential for cancer-associated fibroblast infiltration in tumor microenvironment of triple-negative breast cancer”的文章，研究阐明了EMP1通过介导TNBC和CAFs的细胞通讯在TNBC中发挥癌基因的作用，通过抑制CAFs浸润来靶向抑制EMP1可能是TNBC治疗的一种有前景的策略。

研究结果

1、EMP1在TNBC患者中高度表达，与CAF浸润呈正相关

研究人员通过探究TCGA队列中BC患者的临床信息，发现EMP1与CAF浸润相关，并预测BC预后不良，表明EMP1可能在调节BRCA中的肿瘤微环境中发挥作用。为了进一步验证EMP1在BC中的表达特征，研究人员使用EMP1抗体进行了免疫组织化学实验，发现TNBC患者的EMP1和αSMA蛋白水平高于其他三种亚型BC患者。此外，EMP1蛋白水平与αSMA蛋白水平呈高度正相关。同样，基于大量RNA-seq数据的表达分析也表明EMP1 mRNA水平与ACTA2（αSMA）表达水平之间存在显著的正相关关系。以上结果表明，EMP1表达与BC中CAF浸润呈正相关。进一步对不同亚型的BC组织进行了连续切片，并分别基于EMP1和αSMA抗体进行了免疫组织化学染色。结果表明，EMP1蛋白和SMA蛋白在BC中有很高的共表达和共定位，特别是在TNBC组织中。

图1. EMP1在TNBC中高度表达并与CAF浸润相关

2、EMP1积极调节TNBC细胞的增殖、迁移和侵袭

研究人员检测发现EMP1在TNBC组织中过表达，表明EMP1可能是TNBC中的促肿瘤因子。为了验证这一假设，在TNBC细胞系中进行了EMP1的功能获得和丧失研究。选择EMP1相对低表达的MDA-MB-453细胞系建立EMP1过表达细胞系，EMP1相对高表达的MDA-MB-231 和MDA-MB-468 细胞系中建立EMP1敲低细胞系。为了实现EMP1的有效和特异性敲除，研究人员构建了一种靶向EMP1的4 in 1 shRNA慢病毒，并通过qRT-PCR和WB实验证实了其敲低效率。实验表明，敲除EMP1明显抑制了TNBC细胞系的生长速度、细胞增殖、迁移和侵袭能力。相反，EMP1的过表达明显促进了TNBC细胞系MDA-MB-453的细胞增殖、迁移和侵袭。这些数据共同表明，EMP1在TNBC细胞中发挥癌基因的作用。使用异种移植物小鼠模型研究了EMP1敲除在体内的生物学作用，发现EMP1敲除显著抑制了TNBC细胞体内增殖和转移能力。

图2. EMP1在TNBC细胞系中发挥致癌特性

3、TNBC细胞中EMP1的敲低阻碍了CAF在异种移植物中的浸润

研究人员探究了EMP1在TNBC CAFs浸润中的作用，发现EMP1是TNBC中CAFs增殖所必需的。为了进一步评估EMP1对CAF浸润的体内生物学效应，以5:1的比例重新悬浮TNBC细胞和CAFs，并将细胞注射到裸鼠异种移植物肿瘤模型中。EMP1敲低组的异种移植物肿瘤比对照组更小、更轻。与对照组相比，EMP1敲低组的异种移植物肿瘤CAF浸润水平明显降低。以上表明EMP1在调节TNBC细胞和CAFs之间的串扰方面起着至关重要的作用。机制研究表明EMP1在TNBC细胞中高度表达，通过NF-κB信号通路增强IL6的分泌；同时，TNBC细胞衍生的IL6通过增加活化的AKT水平来促进CAFs增殖，从而促进TNBC的进展和转移。

图3. EMP1是异种移植物中CAF浸润所必需的

研究结论

本研究阐明了EMP1敲低抑制TNBC细胞中NF-κB信号通路，通过抢救实验，证实EMP1通过调节TNBC细胞中IL6的分泌来介导TNBC细胞与CAF之间的相互作用，从而促进CAFs的增殖和浸润，进而介导TNBCs的进展和转移。

本文使用：Lv-4 in 1-shEMP1 慢病毒定制 · 分子克隆 · shRNA