你知道几种动物细胞转化常用方法？

将基因导入哺乳动物细胞的方法有多种，效率也不尽相同，可根据具体情况选择应用。 这里介绍几种常用的方法：

1. 磷酸钙沉淀法

该转化方法是动物细胞转化中经典而又简单的方法。具体做法大致是∶将待转化的 DNA溶解在磷酸缓冲液中，加入CaCl2溶液混匀，形成磷酸钙微结晶与DNA的共沉淀物，滴入细胞培养皿中，37℃保温4~16 h，磷酸钙晶体局部溶解膜结构，DNA便可以进入受体细胞细胞核，并整合到宿主染色体上；弃去 DNA溶液，加入新鲜培养基，继续培养7天即可筛选转化株。在外源DNA中掺入少量的受体细胞内源性DNA，可以提高转化效率。这种方法多数用于单层培养的细胞，也可用于悬浮培养的细胞。

磷酸钙沉淀法具有操作简便、成本低廉、可大批量转染、对细胞毒性较小、效果稳定等优点。但其转染效率较低，对较长（>20kb）的DNA片段效果更差，应用甘油或DMSO对受体细胞进行休克，转染效率会得到一定程度提高。

2. 脂质体介导感染法

这种方法即用脂质体包埋核酸分子，然后将其导入细胞。脂质体是一种人工构建的磷脂双分子层膜，用于转移DNA较理想的膜成分是带负电荷的磷脂酰丝氨酸。利用该方法曾将外源基因成功地导入了小鼠的淋巴细胞和HeLa细胞。

脂质体介导法的优点是效果稳定、感染效率高（比磷酸钙沉淀法高5~100倍）；其缺点是成本较高、对外源基因长度有一定限制、细胞内积累的脂类对细胞有一定的毒性。

3. 显微注射法

显微注射法是创造转基因动物的有效途径。其技术关键如下：①外源基因的制备；②收集受精卵；③显微注射；④受精卵移植。

显微注射法的优点是：①此法可向任何类型细胞导入外源基因，甚至可向受精卵或早期胚胎中导入外源基因；②DNA用量极少，每个细胞仅需10-11 ml的注射体积；③注入细胞的DNA分子数可加以控制；④外源DNA整合到宿主细胞染色体组中的效率可达50%～100%，获得稳定转化系的比例也可达20%。此法的缺点是其设备要求离，且很昂贵。

4. 病毒感染法

通过病毒感染的方式将外源基因导入动物细胞内，是一种常用的转基因方法，例如现在常用的腺病毒、慢病毒和AAV等。这种方法具有定向性好、实验重复性佳、导入效率高等优点。但也存在一定的缺陷，如目前常用的载体宿主范围有限，往往无法感染一些具有重要经济价值的家禽和牲畜细胞等。

5. 电击法

将待转化的DNA溶解于受体细胞悬浮液中，然后加入电击转化仪的样品槽内，两端施加瞬时高压电场，使细胞膜产生细小的缝隙，此时DNA片段便可不经过胞饮作用直接进入受体细胞。电击法常用于对磷酸钙共沉淀法无效的细胞类型，如生长在悬浮液中的淋巴细胞等。

6.血影细胞介导法

血影细胞是指哺乳动物的红细胞在外部压力环境下发生溶血，血红蛋白大量溢出，最后形成仅被细胞膜包裹的细胞结构。在溶血过程中，红细胞膜的通透性大增，在血红蛋白溢出的同时，外源DNA也容易进入。当上述外界条件消失后，红细胞膜又可恢复原来的通透性。因此，可先将外源DNA转入血影细胞，然后再将血影细胞与受体细胞在适当条件下发生细胞融合，从而将外源DNA转入受体细胞。