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克隆载体和表达载体是最常用的两类载体,二者功能与结构各有特点。
克隆载体通常是由质粒、病毒或一段染色体DNA改造而成。质粒是染色体外自主复制的遗传因子,多为共价闭环DNA分子。细菌与真菌的克隆载体常用质粒来构建,只对特殊的要求才用噬菌体构建。动、植物的基因载体更多是用病毒或染色体DNA构建。
作为克隆载体基本的要求是:
①具有自主复制的能力;
②携带易于筛选的选择标记;
③含有多种限制酶的单一识别序列,以供外源基因插入;
④除保留必要序列外,载体应尽可能小,便于导入细胞和进行繁殖;
⑤使用安全。从安全性上考虑,克隆载体应只存在有限范围的宿主,在体内不进行重组,不发生转移,不产生有害性状,并且不能离开工程宿主自由扩散。
如果插入了控制外源基因在宿主细胞内表达的序列,则称为表达载体。
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